ATP熒(ying)光(guang)檢測儀檢測原(yuan)理 常(chang)用ATP熒(ying)光(guang)檢測儀有3M LM1熒(ying)光(guang)檢測儀 海凈(jing)納PLUS V2熒(ying)光(guang)檢測儀 龜(gui)甲萬(wan)PD-30熒(ying)光(guang)檢測儀 紐勤ATP熒(ying)光(guang)檢測儀9902 海凈(jing)納ensure大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)熒(ying)光(guang)檢測儀 國產ATP熒(ying)光(guang)檢測儀等都是采(cai)用以(yi)下(xia)原(yuan)理
能催化熒(ying)光(guang)素氧化並產(chan)生(sheng)生(sheng)物(wu)光(guang)的壹(yi)類(lei)酶被稱(cheng)為熒(ying)光(guang)素酶(Luciferase)。
熒(ying)光(guang)素酶的種(zhong)類(lei)很(hen)多(duo),其(qi)中(zhong)包括:蟲熒(ying)光(guang)素酶,細菌(jun)熒(ying)光(guang)素酶,其(qi)他熒(ying)光(guang)素酶等,
現(xian)在(zai)研(yan)究和應用多(duo)的(de)是螢(ying)火蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶,比如北(bei)美(mei)螢(ying)火蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶、日本螢(ying)火
蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶、歐洲螢(ying)火蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶、北京(jing)螢火蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶等。目前,螢火蟲(chong)熒(ying)光(guang)
素(su)酶的發(fa)光(guang)體系(xi)的研(yan)究主(zhu)要(yao)是來(lai)自(zi)北美(mei)螢(ying)火蟲(chong),而(er)國內生(sheng)產的(de)熒(ying)光(guang)素酶大部分(fen)也
是通過克隆(long)北美(mei)熒(ying)光(guang)素酶基(ji)因方法獲(huo)取(qu)的。雖然各(ge)種(zhong)熒(ying)光(guang)素酶結構(gou)不(bu)同,但其(qi)差
別不(bu)大,具有(you)同源(yuan)性(xing)。其(qi)中(zhong)以(yi)北(bei)美(mei)螢(ying)火蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶為例(li)對(dui)其(qi)基(ji)本特(te)征(zheng)進(jin)行描(miao)述(shu):
北(bei)美(mei)螢(ying)火蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶是由單(dan)壹(yi)多(duo)肽鏈(lian)組(zu)成的(de),含 551 個氨(an)基(ji)酸,不(bu)含輔(fu)助因子
並(bing)且大(da)部分(fen)氨(an)基(ji)酸是非極(ji)性(xing)氨(an)基(ji)酸,分(fen)子量約(yue) 62kD,等電點(dian)是 6.24,在(zai)空(kong)間(jian)結(jie)
構(gou)中(zhong)含有兩對(dui)二(er)硫(liu)鍵(jian),並(bing)且有(you)兩個 Trp,它的大吸收(shou)值(zhi)為(wei) 562nm。具體蛋白(bai)
結(jie)構見(jian)下(xia)圖:
3螢(ying)火蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶催化發光(guang)是在(zai) ATP、熒(ying)光(guang)素和 Mg2+存在(zai)下(xia)發出(chu)黃(huang)綠色(se)熒(ying)
光(guang)的。壹(yi)般(ban)的(de)多數(shu)科學家(jia)認為(wei)熒(ying)光(guang)素酶作為(wei)催(cui)化劑催(cui)化的是 D-熒(ying)光(guang)素,D-熒(ying)光(guang)
素(su)氧化發光(guang)而(er)且在(zai)壹(yi)定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia)熒(ying)光(guang)的發射(she)強度直接(jie)與(yu) ATP 的(de)濃度(du)呈正相(xiang)關(guan)。其(qi)
化學反(fan)應方程(cheng)式(shi)為(wei):
Luciferin+ATP+O2=Oxyluciferin+AMP+PPi+CO2+Light
反(fan)應過程(cheng)先是熒(ying)光(guang)素酶與(yu)熒(ying)光(guang)素結合(he),然後借高能化合(he)物(wu) ATP 提供(gong)的(de)能量,
形成具(ju)有(you)高活(huo)性(xing)的復(fu)合(he)物(wu),此復(fu)合(he)物(wu)與(yu)氧(yang)氣反應形成過氧化物(wu)後,裂(lie)解而(er)形成激(ji)
發(fa)態物(wu)質。熒(ying)光(guang)素的(LH2)活(huo)性(xing)中(zhong)心首(shou)先與(yu)熒(ying)光(guang)素酶結合(he)形成 E-LH2。然(ran)後(hou)再(zai)
與(yu) ATP 作(zuo)用產(chan)生(sheng)焦(jiao)磷酸,後(hou)發(fa)出(chu)熒(ying)光(guang):
形成的(de)過氧化物(wu)可能是二(er)氧(yang)丁環(huan)酮,其(qi)裂(lie)解反應生(sheng)成激(ji)發(fa)態(tai)產物(wu)氧化熒(ying)光(guang)
素(su),激發(fa)態的(de)氧(yang)化熒(ying)光(guang)素發射(she)光(guang)子回到基(ji)態。這壹(yi)反(fan)應簡化為:
42
E-LH +ATP-Mg +O P(L=O)+E-AMP+CO +PPi+h 2 2 2 υ
具(ju)體的化學反(fan)應過程(cheng)如下(xia)
常用ATP熒(ying)光(guang)檢測儀有3M LM1熒(ying)光(guang)檢測儀 海凈(jing)納PLUS V2熒(ying)光(guang)檢測儀 龜(gui)甲萬(wan)PD-30熒(ying)光(guang)檢測儀 紐勤ATP熒(ying)光(guang)檢測儀9902 海凈(jing)納ensure大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)熒(ying)光(guang)檢測儀 國產ATP熒(ying)光(guang)檢測儀及拭子北京(jing)楚齊公司招(zhao)商(shang)加(jia)盟中(zhong)


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