蔬(shu)菜中(zhong)有(you)機(ji)磷和(he)氨基(ji)甲(jia)酸(suan)酯(zhi)類(lei)農(nong)藥殘(can)毒(du)快(kuai)速(su)檢(jian)測(ce)
酶抑制率(lv)法（分(fen)光光度(du)法）試劑使(shi)用(yong)說(shuo)明
      本試劑為(wei)國(guo)家(jia)標(biao)準快速(su)檢(jian)驗方(fang)法GB/T5009.199-2003的(de)配套(tao)試(shi)劑。酶活(huo)性和(he)對農(nong)藥的(de)靈敏(min)度(du)指(zhi)標均(jun)達到(dao)或(huo)超過(guo)了(le)國(guo)家(jia)標(biao)準要(yao)求(qiu)，可(ke)以(yi)在(zai)各種(zhong)型(xing)號的(de)農(nong)藥殘(can)毒(du)檢(jian)測(ce)儀(yi)（分(fen)光光度(du)法）上使(shi)用(yong)，具(ju)有穩定(ding)性好、靈敏(min)度(du)高(gao)和使(shi)用(yong)方(fang)便等特(te)點(dian)。
壹、試劑配制
1. 緩沖(chong)液(ye)試劑： 整包倒(dao)入大燒杯(bei)中(zhong)，加(jia)1000mL純凈水(shui)溶解(jie)，酸(suan)堿(jian)度(du)為(wei)pH8.0，常溫保存；
2. 乙(yi)酰膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶： 取壹支酶粉(fen)加(jia)20mL緩沖(chong)溶(rong)液溶(rong)解，4℃冰(bing)箱(xiang)中(zhong)保存，壹周內(nei)用(yong)完(wan)。也(ye)可(ke)將(jiang)溶解(jie)後的(de)酶液分(fen)成幾個小瓶，將(jiang)其(qi)冷凍(dong)，用(yong)時(shi)融化，但(dan)不(bu)能重復多(duo)次冷凍(dong)、化解。
3. 顯(xian)色(se)劑： 取(qu)壹支顯色劑加(jia)入20mL緩沖(chong)溶(rong)液，避光保存；
4. 底(di)物：取壹支底(di)物加(jia)20mL緩沖(chong)溶(rong)液，搖(yao)勻(yun)後置(zhi)4℃冰(bing)箱(xiang)中(zhong)保存；
二(er)、分(fen)析(xi)步(bu)驟
1. 樣(yang)品(pin)處理(li)： 選取(qu)有代(dai)表性(xing)的(de)蔬(shu)菜樣(yang)品(pin)，沖(chong)洗(xi)掉(diao)表面(mian)泥土，剪成1cm左右(you)見(jian)方(fang)碎片(pian)，取(qu)樣(yang)品(pin)1g，（非(fei)葉(ye)菜類(lei)取(qu)2g）放(fang)入(ru)燒杯或(huo)提(ti)取瓶(ping)中(zhong)，加(jia)入5mL緩沖(chong)溶(rong)液，手(shou)搖振(zhen)蕩(dang)1～2分(fen)鐘(zhong)，或(huo)超聲波(bo)振蕩(dang)30秒鐘(zhong)，倒出提取(qu)液(ye)，靜(jing)置(zhi)3~5min，待用(yong)。
2. 對(dui)照(zhao)溶(rong)液(ye)測(ce)試(shi)： 先(xian)於(yu)試管(guan)中(zhong)加(jia)入100微(wei)升(sheng)酶液和(he)100微(wei)升(sheng)顯色(se)劑，再加(jia)入2.5mL緩沖(chong)溶(rong)液，搖(yao)勻(yun)後於37°C放(fang)置(zhi)15min，加(jia)入100微(wei)升(sheng)底(di)物搖勻(yun)，此時(shi)檢(jian)液開始顯(xian)色(se)反(fan)應，應立即放(fang)入(ru)儀器(qi)比(bi)色(se)池中(zhong)，記(ji)錄初(chu)始(shi)吸光度(du)A1和(he)反應3 min時(shi)的(de)吸光度(du)A2，A2-A1=DA0。
3. 樣(yang)品(pin)溶(rong)液測(ce)試(shi)： 先(xian)於(yu)試管(guan)中(zhong)加(jia)入100微(wei)升(sheng)酶液和(he)100微(wei)升(sheng)顯色(se)劑，再加(jia)入2.5mL樣(yang)品(pin)提(ti)取液，其(qi)它操作與(yu)對(dui)照(zhao)溶(rong)液(ye)測(ce)試(shi)相(xiang)同，記(ji)錄初(chu)始(shi)吸光度(du)A1和(he)反應3 min時(shi)的(de)吸光度(du)A2，A2-A1=DAt。
三(san)、結果計算
結果以(yi)酶被(bei)抑制的(de)程(cheng)度(du)（抑(yi)制率(lv)）表示(shi)。
抑制率(lv)(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100
      當蔬(shu)菜樣(yang)品(pin)提(ti)取液對酶的(de)抑制率(lv)≥50%時(shi)，表示(shi)蔬(shu)菜中(zhong)有(you)高(gao)劑量(liang)有(you)機(ji)磷或(huo)氨基(ji)甲(jia)酸(suan)酯(zhi)類(lei)農(nong)藥存(cun)在，樣(yang)品(pin)為(wei)陽性結果。陽(yang)性(xing)結果的(de)樣(yang)品(pin)需(xu)要(yao)重復檢(jian)驗2次以上。
      對陽(yang)性結果的(de)樣(yang)品(pin)，可(ke)用(yong)其(qi)它方(fang)法進壹步(bu)確定(ding)具體(ti)農(nong)藥品(pin)種(zhong)和(he)含(han)量。
四(si)、註(zhu)意(yi)
1. 每批(pi)樣(yang)品(pin)的(de)控制時(shi)間(jian)、溫度(du)條件必須(xu)與(yu)對(dui)照(zhao)溶(rong)液(ye)的(de)條件*壹致。
2. 蔥(cong)、蒜(suan)、蘿蔔、韭(jiu)菜、芹菜、香(xiang)菜、茭白、蘑菇及番茄汁液(ye)中(zhong)，含(han)有對(dui)酶有影(ying)響(xiang)的(de)植物(wu)次生物(wu)質(zhi)，容易產(chan)生假(jia)陽性。處理(li)這類(lei)樣(yang)品(pin)時(shi)，不(bu)要(yao)剪的(de)太碎(sui)。對(dui)壹些含(han)葉(ye)綠(lv)素(su)較(jiao)高的(de)蔬(shu)菜，也(ye)不(bu)要(yao)剪的(de)太碎(sui)。
3. 當溫度(du)條件低(di)於37°C，酶反應的(de)速(su)度(du)隨(sui)之(zhi)放慢(man)，加(jia)入酶液和(he)顯(xian)色劑後放置(zhi)反應的(de)時(shi)間(jian)應相(xiang)對(dui)延(yan)長(chang)，延(yan)長(chang)時(shi)間(jian)的(de)確定(ding)，應以膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶對照(zhao)溶(rong)液(ye)測(ce)試(shi)得(de)到(dao)的(de)吸光度(du)A2-A1≥ 0.3以(yi)上，即可(ke)往(wang)下操作。當對照(zhao)溶(rong)液(ye)酶液的(de)加(jia)入量大壹些時(shi)，也(ye)可(ke)使(shi)A2-A1≥0.3上。
4. 當吸光度(du)大到無(wu)法讀取(qu)時(shi)，說(shuo)明測(ce)定(ding)液渾(hun)濁(zhuo)有幹(gan)擾(rao)。
五、產(chan)品(pin)有(you)關(guan)技(ji)術指標(biao)
1. 代(dai)表性(xing)農(nong)藥的(de)檢(jian)出下限(xian)見(jian)下表
農(nong)藥名稱(cheng) 檢(jian)出限mg/kg 標(biao)準(zhun)要(yao)求(qiu)檢(jian)出限mg/kg
甲(jia)安(an)磷 0.65 2.0
氧華了果 0.5 0.8
2敵畏 0.01 0.1
呋(fu)南丹(dan) 0.01 0.3
2. 乙(yi)酰膽(dan)堿(jian)酯(zhi)酶的(de)活(huo)性：（室(shi)溫20°C以上進行實(shi)驗(yan)）DA0≥0.3。
六、包裝(zhuang)及保存條件
每包(bao)可(ke)做200份樣(yang)品(pin)，0°C以(yi)下冰(bing)箱(xiang)冷(leng)凍(dong)保質期(qi)為(wei)三年，配成試劑後保存期(qi)為(wei)壹周。